Сравнение методов определения anti-dsDNA: ИФА, ХИА и нРИФ

Сравнение методов определения антител к двуспиральной ДНК (anti-dsDNA), таких как ИФА, ХИА и нРИФ, является ключевым этапом в диагностике системной красной волчанки и других аутоиммунных заболеваний. Выбор конкретного теста зависит от диагностической задачи — будь то первичный скрининг или подтверждение диагноза. Антитела к двуспиральной ДНК — это специфические аутоантитела, то есть белки иммунной системы, которые по ошибке атакуют собственную ДНК организма. Их наличие в крови является важным серологическим маркером, особенно для системной красной волчанки (СКВ), и часто связано с поражением почек (волчаночным нефритом). Понимание различий между методами помогает врачу и пациенту правильно интерпретировать результаты и определить дальнейшую тактику.

Что такое антитела к двуспиральной ДНК и почему их важно определять

Антитела к двуспиральной ДНК (anti-dsDNA) — это одна из разновидностей антинуклеарных антител, направленных против компонентов ядра собственных клеток организма. В норме иммунная система не реагирует на свои же структуры, но при аутоиммунных заболеваниях этот механизм нарушается. Появление anti-dsDNA в высоких концентрациях считается высокоспецифичным признаком системной красной волчанки. Их уровень коррелирует с активностью заболевания: при обострении он, как правило, повышается, а во время ремиссии — снижается. Именно поэтому определение концентрации этих антител используется не только для первичной диагностики, но и для мониторинга течения СКВ и оценки эффективности лечения. Своевременное выявление anti-dsDNA позволяет вовремя начать терапию и предотвратить серьезные осложнения, в первую очередь тяжелое поражение почек.

Иммуноферментный анализ (ИФА): базовый метод скрининга

Иммуноферментный анализ, или ИФА, является одним из наиболее распространенных методов для первичного выявления антител к двуспиральной ДНК. Этот метод широко используется в лабораториях благодаря его высокой чувствительности и возможности автоматизации процесса.

Принцип работы ИФА заключается в следующем: на дно специального пластикового планшета наносят очищенную двуспиральную ДНК (антиген). Затем в лунки планшета добавляют сыворотку крови пациента. Если в ней присутствуют искомые anti-dsDNA, они связываются с антигеном. На следующем этапе добавляют вторые антитела, меченные специальным ферментом, которые присоединяются к комплексу «антиген-антитело». Последний шаг — добавление бесцветного субстрата, который под действием фермента меняет цвет. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству anti-dsDNA в образце. Специальный прибор (спектрофотометр) измеряет эту интенсивность и выдает количественный результат.

• Преимущества: высокая чувствительность (хорошо выявляет даже низкие концентрации антител), количественный результат, высокая производительность и возможность автоматизации.
• Недостатки: возможна более низкая специфичность по сравнению с нРИФ. Это означает, что иногда ИФА может давать ложноположительные результаты из-за перекрестной реакции с другими антителами, не связанными с СКВ. Поэтому положительный результат, полученный методом ИФА, часто требует подтверждения более специфичным тестом.

Хемилюминесцентный иммуноанализ (ХИА): современный и точный подход

Хемилюминесцентный иммуноанализ (ХИА) — это более современная и усовершенствованная версия иммуноанализа. По принципу действия он схож с ИФА, но вместо цветной реакции здесь используется реакция, сопровождающаяся свечением (люминесценцией).

В основе метода лежит использование антител, меченных не ферментом, а хемилюминесцентной меткой. При добавлении специального активатора происходит химическая реакция, которая вызывает свечение. Интенсивность этого свечения измеряется высокочувствительным прибором — люминометром. ХИА позволяет определять антитела к двуспиральной ДНК в очень широком диапазоне концентраций, что делает его крайне точным.

• Преимущества: очень высокая чувствительность и специфичность, широкий диапазон измеряемых концентраций, полная автоматизация процесса, высокая скорость получения результата. ХИА часто превосходит традиционный иммуноферментный анализ по точности.
• Недостатки: более высокая стоимость исследования по сравнению с ИФА, требует наличия специализированного дорогостоящего оборудования.

Непрямая реакция иммунофлюоресценции (нРИФ): золотой стандарт подтверждения

Непрямая реакция иммунофлюоресценции (нРИФ) на субстрате Crithidia luciliae исторически считается «золотым стандартом» для подтверждения наличия anti-dsDNA. Crithidia luciliae — это одноклеточный жгутиковый микроорганизм, у которого есть гигантская митохондрия, называемая кинетопластом. Важно, что ДНК внутри этого кинетопласта является чисто двуспиральной и не содержит других ядерных антигенов, что исключает перекрестные реакции.

В ходе анализа на предметное стекло с фиксированными микроорганизмами Crithidia luciliae наносят сыворотку пациента. Если в ней есть антитела к двуспиральной ДНК, они связываются с ДНК кинетопласта. Затем добавляют вторые антитела, меченные флюоресцентным красителем. При просмотре под люминесцентным микроскопом врач видит характерное свечение кинетопластов. Результат обычно выражается в титрах (например, 1:10, 1:40), что является полуколичественной оценкой.

• Преимущества: очень высокая специфичность. Метод выявляет преимущественно высокоавидные антитела, то есть те, которые прочно связываются с ДНК. Именно такие anti-dsDNA наиболее тесно связаны с активностью системной красной волчанки и риском поражения почек.
• Недостатки: меньшая чувствительность по сравнению с ИФА и ХИА, трудоемкость, субъективность оценки результата (зависит от опыта лаборанта), полуколичественный результат.

Сравнительная таблица методов определения anti-dsDNA

Для наглядности основные характеристики каждого метода можно свести в единую таблицу, которая поможет понять их сильные и слабые стороны.

Как врач выбирает метод исследования: от скрининга к подтверждению

Выбор метода для определения антител к двуспиральной ДНК не является случайным и подчиняется четкой логике. Врач выстраивает диагностическую стратегию, чтобы получить максимально достоверную информацию с минимальными затратами времени и ресурсов. Как правило, используется двухэтапный подход.

На первом этапе, для первичной диагностики (скрининга), предпочтение отдается высокочувствительным методам — ИФА или ХИА. Их задача — не пропустить ни одного потенциально больного человека. Если результат скрининга отрицательный, то с высокой долей вероятности клинически значимых anti-dsDNA у пациента нет.

Если же результат, полученный методом иммуноферментного анализа или ХИА, оказывается положительным, требуется второй этап — подтверждение. Здесь на сцену выходит нРИФ как метод с высочайшей специфичностью. Положительный результат в нРИФ-тесте с высокой вероятностью подтверждает диагноз системной красной волчанки, особенно при наличии соответствующих клинических симптомов. Такая двухступенчатая система позволяет избежать как ложноотрицательных, так и ложноположительных результатов, обеспечивая высокую точность диагностики.

Что важно помнить пациенту при интерпретации результатов

Получив на руки бланк с результатами анализа на антитела к двуспиральной ДНК, многие испытывают тревогу. Важно понимать несколько ключевых моментов. Во-первых, положительный результат анализа — это еще не диагноз. Диагноз «системная красная волчанка» ставится врачом-ревматологом на основании совокупности данных: жалоб, клинического осмотра, результатов множества лабораторных и инструментальных исследований. Анализ на anti-dsDNA — лишь один, хотя и очень важный, элемент этой мозаики.

Во-вторых, уровень anti-dsDNA может колебаться. Небольшое превышение референсных значений, особенно при отсутствии симптомов, может не иметь клинического значения. В то же время высокие титры антител требуют пристального внимания и обязательной консультации специалиста. Категорически не рекомендуется самостоятельно интерпретировать результаты и, тем более, назначать себе лечение. Только врач может оценить всю клиническую картину и принять верное решение о дальнейших действиях.

Список литературы

1. Насонов Е.Л., Насонова В.А. Ревматология: Национальное руководство. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. — 720 с.
2. Клинические рекомендации. Системная красная волчанка. Разработчик: Ассоциация ревматологов России. — 2021.
3. Клиническая иммунология и аллергология: учебник / под ред. А. В. Караулова. — 4-е изд., перераб. и доп. — М.: Медицинское информационное агентство, 2022. — 752 с.
4. Aringer M., Costenbader K., Daikh D. et al. 2019 European League Against Rheumatism/American College of Rheumatology classification criteria for systemic lupus erythematosus // Arthritis & Rheumatology. — 2019. — Vol. 71, No. 9. — P. 1400–1412.
5. Wallace D.J., Hahn B.H. (Eds.). Dubois' Lupus Erythematosus and Related Syndromes. — 9th ed. — Elsevier, 2018. — 1008 p.
6. Firestein G.S., Budd R.C., Gabriel S.E., McInnes I.B., O'Dell J.R. (Eds.). Kelley and Firestein's Textbook of Rheumatology. — 10th ed. — Elsevier, 2016. — 2176 p.