Как правильно подготовиться к сдаче генетического ПЦР-анализа

Правильная подготовка к сдаче генетического ПЦР-анализа — это ключевой этап, от которого напрямую зависит точность и достоверность результата. Полимеразная цепная реакция является высокочувствительным методом, способным обнаружить даже минимальное количество генетического материала. Именно поэтому любые нарушения в процессе подготовки могут привести к искажению данных, необходимости повторного исследования или, что хуже, к неверным клиническим выводам. Понимание простых, но строгих правил подготовки помогает пациенту чувствовать себя увереннее и обеспечивает лабораторию качественным биоматериалом для исследования.

Что такое генетический ПЦР-анализ и почему важна подготовка

Генетический анализ методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) — это лабораторное исследование, направленное на выявление конкретных участков ДНК. В отличие от ПЦР-тестов на инфекции, которые ищут генетический материал вирусов или бактерий, генетический анализ ищет мутации, полиморфизмы или другие особенности в собственной ДНК человека. Метод основан на многократном копировании (амплификации) нужного фрагмента ДНК, что позволяет обнаружить его даже при очень низкой исходной концентрации.

Именно эта чрезвычайная чувствительность делает метод уязвимым к внешним факторам. Существует два основных риска, связанных с неправильной подготовкой:

• Контаминация (загрязнение). Попадание в образец чужеродной ДНК (например, из пищи, напитков, слюны другого человека) может привести к ложноположительному результату или сделать анализ невозможным.
• Ингибирование реакции. Некоторые вещества, попадающие в биоматериал, могут блокировать работу ферментов, отвечающих за копирование ДНК. Это приводит к ложноотрицательному или неопределенному результату.

Тщательное соблюдение правил подготовки минимизирует эти риски и является залогом получения точного результата с первого раза, что особенно важно, когда речь идет о диагностике наследственных заболеваний или определении генетических предрасположенностей.

Общие правила подготовки к исследованию методом ПЦР

Независимо от того, какой биологический материал будет использоваться для анализа (кровь, слюна или соскоб со щёки), существует ряд универсальных рекомендаций. Их необходимо соблюдать для обеспечения чистоты образца и надежности исследования.

Вот основные правила, которых следует придерживаться:

• Алкоголь. Необходимо полностью исключить прием алкогольных напитков за 3 суток до сдачи анализа. Этанол и продукты его распада могут влиять на биохимические процессы в клетках и выступать в качестве ингибиторов реакции.
• Курение. Следует воздержаться от курения как минимум за 1–3 часа до сдачи биоматериала. Компоненты табачного дыма могут оседать на слизистой рта и попадать в слюну или соскоб, что негативно сказывается на качестве ДНК.
• Лекарственные препараты. О приеме любых лекарственных средств, включая витамины и биологически активные добавки, необходимо заранее сообщить лечащему врачу. Врач определит, может ли препарат повлиять на результат, и при необходимости скорректирует схему приема или отложит исследование. Особенно это касается антибиотиков, антикоагулянтов и препаратов для химиотерапии.
• Физические и эмоциональные нагрузки. За 24 часа до исследования рекомендуется избегать интенсивных физических нагрузок и стрессовых ситуаций. Сильный стресс может вызвать изменения в гормональном фоне, что косвенно способно повлиять на некоторые показатели.

Особенности подготовки в зависимости от типа биоматериала

Требования к подготовке могут незначительно отличаться в зависимости от того, какой именно биоматериал будет взят для анализа. Выбор материала определяет врач на основе целей исследования. Наиболее часто для генетического анализа методом полимеразной цепной реакции используют венозную кровь, буккальный эпителий или слюну.

В следующей таблице представлены ключевые особенности подготовки для каждого типа образца.

Какие факторы могут повлиять на результат генетического ПЦР-теста

Даже при соблюдении основных правил существуют факторы, способные исказить результат исследования. Понимание этих факторов поможет избежать случайных ошибок. Все потенциальные помехи можно разделить на две большие группы: ингибиторы и контаминанты.

Вот перечень наиболее распространенных из них:

• Ингибиторы реакции. Это химические вещества, которые блокируют процесс амплификации ДНК. К ним относятся:
  • Гепарин (антикоагулянт, который может использоваться в пробирках для сбора крови). Лаборатории для генетических исследований используют специальные пробирки с другим антикоагулянтом (ЭДТА).
  • Этанол (алкоголь).
  • Компоненты некоторых пищевых продуктов (например, полифенолы в чае или кофе).
  • Вещества, содержащиеся в зубной пасте или ополаскивателях для рта.
• Контаминанты (загрязнители). Это источники чужеродной ДНК, которые могут попасть в образец. К ним относятся:
  • Микроорганизмы полости рта. Их ДНК может конкурировать с ДНК человека в процессе ПЦР, поэтому важно полоскать рот водой.
  • Частицы пищи. Остатки еды во рту — это прямой источник чужой ДНК (растительной или животной).
  • ДНК других людей. Поцелуи или использование чужой зубной щетки незадолго до сдачи слюны или соскоба могут привести к загрязнению образца.

Если по какой-либо причине правила подготовки были нарушены, об этом необходимо честно сообщить медицинскому персоналу перед сдачей анализа. Это позволит избежать неверной интерпретации результатов и сэкономит время и ресурсы.

Подготовка к сдаче анализа у детей

Подготовка ребенка к сдаче генетического анализа требует особого подхода, так как маленьким пациентам сложнее соблюдать строгие правила. Для детей, особенно грудного возраста, наиболее предпочтительным материалом является буккальный соскоб, так как его взятие безболезненно и неинвазивно.

Основные рекомендации для родителей:

• Грудные дети. Соскоб следует брать не ранее чем через 1–2 часа после кормления (грудным молоком или смесью). Перед процедурой можно дать ребенку попить немного чистой воды, чтобы смыть остатки молока со слизистой щёк.
• Дети старшего возраста. Важно в доступной форме объяснить ребенку, что будет происходить. Следует проконтролировать, чтобы за 1–2 часа до анализа он не ел, не пил сладких напитков и не чистил зубы. Процедура взятия соскоба быстрая и не вызывает боли, что стоит подчеркнуть, чтобы снизить тревожность ребенка.
• Психологический комфорт. Спокойствие родителей передаётся ребенку. Важно сохранять позитивный настрой и не показывать собственного волнения. Процедуру лучше проводить в игровой форме, если это возможно.

Что делать после сдачи анализа

После того как биологический материал сдан, никаких специальных ограничений в образе жизни не требуется. Можно сразу возвращаться к обычному режиму питания и физической активности. Результаты генетического анализа методом полимеразной цепной реакции обычно готовятся от нескольких дней до нескольких недель в зависимости от сложности исследования и загруженности лаборатории. Сроки готовности следует уточнять в том медицинском учреждении, где проводился забор материала. Интерпретацию результатов проводит исключительно врач-генетик или лечащий врач, который направил на исследование.

Список литературы

1. Гинтер Е.К. Медицинская генетика: учебник. — М.: Медицина, 2003. — 448 с.
2. Бочков Н.П. Клиническая генетика: учебник. 4-е изд., доп. и перераб. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. — 592 с.
3. Ребриков Д.В., Саматов Г.А., Трофимов Д.Ю. и др. ПЦР «в реальном времени». — М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2009. — 223 с.
4. Nussbaum R.L., McInnes R.R., Willard H.F. Thompson & Thompson Genetics in Medicine. 8th ed. — Philadelphia: Elsevier, 2016. — 544 p.
5. Клинические рекомендации «Медико-генетическое консультирование и пренатальная диагностика врожденных пороков развития». Российское общество медицинских генетиков. — 2019.