Правильная подготовка к ПЦР-анализу для получения точного результата

Правильная подготовка к ПЦР-анализу является ключевым условием для получения достоверного результата. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это высокочувствительный метод молекулярной диагностики, который позволяет обнаружить даже минимальное количество генетического материала (ДНК или РНК) возбудителя в биологическом образце. Именно из-за этой чувствительности метод требователен к соблюдению строгих правил на этапе подготовки и сбора материала. Несоблюдение рекомендаций может привести к ложноотрицательному или ложноположительному результату, что повлечет за собой неверную диагностику и неправильное лечение. Понимание простых, но важных правил подготовки поможет избежать диагностических ошибок и сэкономить время и ресурсы.

Почему так важна правильная подготовка к анализу методом ПЦР

Чтобы понять значимость подготовки, необходимо кратко разобраться в сути метода. Полимеразная цепная реакция многократно копирует (амплифицирует) определенный фрагмент нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) возбудителя. Если в образце есть хотя бы одна копия искомого генетического материала, метод ее обнаружит. Однако на этот процесс могут повлиять два основных фактора: контаминация и ингибирование.

• Контаминация — это попадание в пробу чужеродного генетического материала. Например, ДНК из частичек пищи или бактерий полости рта может загрязнить мазок из зева и привести к ложноположительному результату или неспецифической реакции.
• Ингибирование — это присутствие в образце веществ, которые подавляют или блокируют реакцию. Компоненты некоторых лекарственных средств, спирт и даже вещества из зубной пасты или жевательной резинки могут выступать в роли ингибиторов, мешая ферментам работать. Это приводит к ложноотрицательному результату: возбудитель в пробе есть, но из-за ингибиторов метод его «не видит».

Таким образом, цель подготовки — обеспечить «чистоту» биологического материала, чтобы в нем не было ничего, что могло бы помешать точному проведению полимеразной цепной реакции.

Общие правила подготовки к полимеразной цепной реакции

Существуют универсальные рекомендации, которые применимы к большинству видов ПЦР-исследований, независимо от того, какой биологический материал будет сдаваться. Соблюдение этих правил создает благоприятный фон для получения точного результата.

Вот основные общие рекомендации:

• Исключение алкоголя. Этанол является сильным ингибитором ПЦР, поэтому следует воздержаться от употребления алкогольных напитков как минимум за 24–48 часов до сдачи любого биоматериала.
• Консультация по лекарственным препаратам. За 10–14 дней до исследования необходимо по согласованию с лечащим врачом прекратить прием антибиотиков и противовирусных препаратов, так как они напрямую влияют на количество возбудителя в организме и могут привести к ложноотрицательному результату. Прием других препаратов следует обсудить с врачом, назначившим анализ.
• Ограничение физических и эмоциональных нагрузок. Сильный стресс и интенсивные физические нагрузки могут вызывать изменения в биохимических процессах организма, что потенциально способно повлиять на некоторые виды исследований. Рекомендуется накануне сдачи анализа провести день в спокойном режиме.

Особенности подготовки к ПЦР в зависимости от вида биоматериала

Требования к подготовке напрямую зависят от того, какой биологический материал будет использоваться для исследования. Это связано с тем, что потенциальные ингибиторы и источники контаминации различаются для разных локализаций.

Ниже представлены ключевые правила подготовки для самых распространенных видов ПЦР-анализов:

• Мазок из ротоглотки и носоглотки. Это самый частый вид анализа для диагностики респираторных инфекций. За 3–4 часа до взятия мазка строго запрещается: есть, пить любую жидкость (включая воду), чистить зубы, полоскать рот и горло, использовать спреи для горла или капли в нос, курить, жевать жевательную резинку. Все это может механически «смыть» возбудителя со слизистой или внести в пробу ингибирующие вещества.
• Кровь (венозная). Анализ крови методом ПЦР обычно требует сдачи натощак. Это означает, что последний прием пищи должен быть за 8–12 часов до процедуры. В этот период можно пить только чистую негазированную воду. За 1–2 дня до анализа рекомендуется исключить из рациона жирную и жареную пищу. За 30 минут до взятия крови следует воздержаться от курения и физического напряжения.
• Моча. Для анализа собирается первая утренняя порция мочи в стерильный контейнер. Перед сбором необходимо провести тщательный туалет наружных половых органов без использования антисептических средств. Для исследования собирается средняя порция мочи (первые несколько секунд нужно мочиться в унитаз, затем подставить контейнер и закончить мочеиспускание снова в унитаз).
• Урогенитальный мазок. Этот вид исследования требует наиболее тщательной подготовки. Женщинам рекомендуется сдавать анализ до начала менструации или через 2–3 дня после ее окончания. За 2–3 дня до анализа следует исключить половые контакты. Накануне и в день сдачи нельзя проводить спринцевание, использовать вагинальные свечи, кремы или тампоны. Мужчинам рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 2–3 часов до взятия мазка.
• Слюна. Правила подготовки схожи с мазком из ротоглотки, но могут быть еще строже. За 3–4 часа до сбора слюны нельзя есть, пить, курить, чистить зубы. За 10 минут до сбора рекомендуется прополоскать рот чистой кипяченой водой комнатной температуры.

Что может исказить результат полимеразной цепной реакции: таблица факторов

Для лучшего понимания того, как различные действия могут повлиять на точность исследования, все потенциальные факторы риска удобно свести в единую таблицу. Это поможет наглядно оценить важность каждого пункта подготовки.

Для наглядности, основные факторы, влияющие на результат, сведены в таблицу:

Влияние лекарственных препаратов на точность ПЦР-теста

Вопрос о влиянии медикаментов является одним из самых частых и важных. Многих пациентов беспокоит, как прием постоянных лекарств, назначенных по поводу хронических заболеваний, отразится на результате ПЦР-исследования. Важно разделять препараты системного и местного действия.

Препараты, которые могут напрямую повлиять на результат, — это те, что обладают противомикробной или противовирусной активностью и действуют непосредственно в месте взятия биоматериала. К ним относятся антибиотики, противовирусные средства, антисептические растворы для полоскания, вагинальные суппозитории, назальные спреи с антибактериальным компонентом. Их применение снижает концентрацию возбудителя, и ПЦР может его не обнаружить.

Большинство препаратов для лечения хронических заболеваний (например, гипотензивные, сахароснижающие, гормональные) не оказывают прямого влияния на результат полимеразной цепной реакции. Однако перед сдачей анализа абсолютно необходимо сообщить врачу обо всех принимаемых лекарствах. Только специалист может оценить потенциальное влияние конкретного препарата на результат и дать рекомендации о временной отмене или замене, если это клинически возможно и безопасно.

Список литературы

1. Ребриков Д. В., Саматов Г. А., Трофимов Д. Ю. ПЦР «в реальном времени». — М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2009. — 223 с.
2. Кишкун А. А. Руководство по лабораторным методам диагностики. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. — 798 с.
3. ГОСТ Р 53079.4-2008. Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа.
4. McPherson R. A., Pincus M. R. Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. 23rd ed. Elsevier, 2017. — 1584 p.
5. Всемирная организация здравоохранения. Рекомендации по стратегии лабораторного тестирования на COVID-19: временное руководство, 21 марта 2020 г.